哪些器械和化妝品應該做透皮吸收試驗？如何做？依據標準有哪些？
南京西格瑪醫學
透皮吸收試驗是化妝品安全評估中的毒理試驗之一。我國官方有關化妝品透皮吸收試驗的標準規定或資料幾乎為空白，然而很多企業在化妝品研發時，透皮吸收試驗可能又是化妝品安全性評價程序需要進行的第一階段試驗。
道理也很簡單，化妝品必須經皮吸收以后才能發揮其功效作用，但是化妝品區別于藥物，它的功效成分的透皮吸收不需要透過皮膚進入人體循環，只需要作用于皮膚表面或者是進入皮膚的表皮、真皮等不同皮膚層，之后在其部位積聚并發揮有效作用即可。所以如何保證化妝品皮膚吸收的安全定性或定量，也是做透皮吸收試驗的意義所在。
如果你是化妝品研發企業，在化妝品備案或注冊過程中，毒理學試驗是必須提交的資料之一。但是哪些化妝品應該做透皮吸收試驗？如何做？依據標準有哪些？相信都是很多化妝品公司疑惑的地方。
透皮吸收試驗有兩大類一類是體外試驗，一類體內試驗，在官方資料不完善的情況下，如何選擇官方認可的透皮吸收試驗就成為企業急需了解的問題。大家也了解，化妝品安全檢測報告必須要有理有據，即便沒有針對性標準，參考相關標準也是可以的，那么透皮吸收試驗應該依據哪個標準來做呢？下面我們就這些關鍵問題，為大家介紹一下。
哪些化妝品應該做透皮吸收試驗？
這個問題的答案，其實在官方文件中還真有提到，不過只是“藏的有點深”。我們可以翻看，在最新的《化妝品安全評估技術導則（2021年版）》第五章節“毒理學研究”第11小節中，對“透皮吸收”做了明確說明，所以化妝品完全可以參考該章節的規定做透皮吸收試驗。具體規定如下：
1.無原料和/或風險物質的透皮吸收試驗，可采用國際通用的透皮吸收試驗方法獲取相應的數據。在透皮吸收數據時，吸收率以100%計；
2.若滿足以下部分條件：分子量﹥500道爾頓，高度電離，脂水分配系數Log Pow≤-1或≥4，拓撲極性表面積>120?2，熔點>200℃，吸收率以10%計；
3.若化學合成的由一種或一種以上結構單元，通過共價鍵鏈接，平均相對分子質量大于1000道爾頓，且相對分子質量小于1000道爾頓的低聚體含量少于10%，結構和性質穩定的聚合物（具有較高生物活性的原料除外），可不考慮透皮吸收。
4.吸收率不以100%計時，需提供有關情況說明。
總結來講，功效宣稱有保濕、美白、延緩衰老等的化妝品，需要建立在透皮吸收試驗的基礎上開展安全性評價程序。
做化妝品透皮吸收試驗應該依據哪些標準？
化妝品透皮吸收試驗分為體內試驗和體外試驗。體內試驗一般是指通過測量化合物經尿液和排泄物排出體外的量來反映經皮吸收量。
但是，實際操作中，體內實驗受到許多因素的制約，如檢
測方法的敏感度、倫理約束、化合物及其代謝產物的排出速率、個體差異等。因此，對于化妝品成份來說，體內試驗沒有實際應用價值。
除非在必要時，如用于體內與體外方法的對比、特殊活性物質皮膚吸收的確認，可采用無毛的裸鼠進行體內研究。體內試驗可參考GB/T 27825-2011 《化學品 皮膚吸收 體內試驗方法》。
體外試驗是化妝品透皮吸收試驗的主流方法。檢測方法主要有體外擴散池法、人工滲透膜和數學模型等，其中擴散池試驗是評估化合物經皮通透性的最好的方法。
簡單來說，擴散池法就是將人或動物的離體皮膚安裝在擴散池上，定時取接收液，用適宜的分析方法測定有效成分的含量，計算透皮速率來評價化學物的滲透特性。擴散池可分為靜態擴散池和動態擴散池兩大類，OECD化學物透皮吸收的體外方法測試指南適用于這兩類擴散池模型。
靜態擴散池有Franz擴散池和Valia-Chien擴散池兩種，其中Franz擴散池為垂直式擴散池，即皮膚模型將擴散裝置分為上下兩室（圖2），此種擴散池最為常用。體外試驗可參考GB/T 27818-2011《化學品 皮膚吸收 體外試驗方法》。
化妝品透皮吸收試驗應該如何做？
參考GB/T 27818-2011《化學品 皮膚吸收 體外試驗方法》。我們為一個要做透皮吸收試驗客戶，推薦了體外擴散池法。
通常體外試驗用的離體皮膚有動物皮膚、離體人皮膚以及三維重組皮膚模型幾大類。不同種屬、品系的動物，甚至同一動物不同解剖部位的皮膚結構均不相同，因此其皮膚通透性不同，各種屬動物皮膚通透性順序為：家兔>大鼠>豚鼠>小型豬>恒河猴>人。
我們在大量化妝品透皮吸收試驗研究中，在這些不同的動物皮膚中，豬皮膚的滲透性與人體皮膚最為接近，豬的皮膚厚度與人體皮膚厚度相似，且豬的體表面積大，可同時采集多個標本。
豬角質層含有與人體角質層非常相似的蛋白質成分，其可變纖維密度、細胞重疊區域、真皮層膠原纖維、纖維束的結構、膠原纖維的厚度以及真皮層血管的數量、大小、分布都與人體皮膚十分相似，并且許多抗體在豬皮膚上也顯示出了與人體皮膚相似的免疫活性。因此我們制定的方案就是使用巴馬香豬的離體豬皮來進行。
Franz擴散池試驗方案
1.實驗耗材與試劑
1.1 儀器
紫外分光光度計；改進Franz擴散池（擴散面積4.52 cm2，接受室體積13 mL）；超級恒溫水浴裝置及磁力攪拌器。
1.2 試劑
0.15%濃度RHC（重組膠原蛋白），PBS。
1.3 動物
實驗用小型乳豬（巴馬香豬，體重約7 kg）
2.實驗方法與步驟
2.1離體豬皮的制備
巴馬香豬處死后立即用電動剪毛刀剪去腹部皮膚毛，剝離去毛部位皮膚，去除皮下組織后用生理鹽水沖洗干凈，置于生理鹽水中浸泡約30 min，取出，用濾紙吸干，備用。
2.2 溶液的制備
2.2.1 對照品溶液的制備：精密稱取RHC對照品適量，置50 mL容量瓶中，加5 mL磷酸緩沖液進行溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取2mL，置100mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL中含0.2mg的溶液，即為對照品溶液（RHC濃度為0.2mg/mL）。
2.2.2 樣品溶液的制備（透皮性試驗）：取出儲備豬皮，解凍，生理鹽水洗凈，將其夾在接受室和供給室之間，皮膚外層表皮朝向供給室，調整水溫系統溫度為32±1℃，攪拌速率為200 r/min，在接受室加入預溫32±1℃的PBS溶液，將氣泡全部排出，將豬皮內層表面與接受液接觸，再將1mg /mL的RHC溶液注入供給室緊貼于豬皮表面，于0.5h、1h、2h、4h、12h后用注射器吸取接受液適量，孔徑為0.45m的濾膜進行過濾，取濾液作為樣品溶液。
2.2.3 空白基質液的制備：取空白基質適量，加入至注入室，0.5h、1h、2h、4h、12h后分別取接收液適量，孔徑為0.45 m的濾膜進行過濾，取濾液作為空白基質液。
2.3 HPLC分析
分別取上述對照品溶液、樣品溶液、空白基質液進行HPLC測定，波長范圍220 nm。
3.實驗結果與分析
通過對比對照品溶液、樣品溶液、空白基質液經230 nm下HPLC檢測是否存在吸收峰，判斷重組膠原蛋白是否透過了皮膚。
以上便是化妝品透皮試驗最為詳細的介紹。目前來講，體外擴散池法以其諸多優點仍是目前最常用的獲得化妝品功效成分經皮釋放曲線，及其在不同皮膚結構中分布情況的檢測方法。
當然，除了該方法，類似膠帶粘貼技術也可以用來測定角質層中化學物質含量，不過雖然該方法能很好地反映涂抹受試物局部皮膚的透皮吸收情況，但是缺點就是對志愿者的皮膚屏障有損傷作用。
此外類似傅里葉變換衰減全反射紅外光譜法、共聚焦拉曼顯微鏡和熒光壽命顯微成像技術等無創、實時的檢測技術也在化妝品透皮吸收方面的應用越來越廣泛，但是這些檢測設備通常較為昂貴，而且這些光譜測試方法對實驗者要求較高，實驗時一般要求測試部位長時間保持不能移動，具有一定挑戰性。
綜上所述，體外擴散池法仍是化妝品透皮試驗最好的選擇。
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